מדריך מעבדה
איך מכינים פפטיד
שחזור פפטיד, שלב אחר שלב: מה צריך, איך מוסיפים את המים, איך מחשבים ריכוז ואיך מאחסנים.
מה זה שחזור?
פפטידים מגיעים כאבקה מיובשת בהקפאה (ליופיליזציה), כדי שיישמרו יציבים לאורך זמן. שחזור הוא הוספת נוזל לאבקה כדי לקבל תמיסה בריכוז ידוע.
מה צריך
- בקבוקון הפפטיד (אבקה)
- מים בקטריוסטטיים (BAC Water)
- מזרק סטרילי חדש
- פדי אלכוהול
- כפפות
שלב אחר שלב
- 1
מגיעים לטמפרטורת החדר
מוציאים את הבקבוקון מהקירור וממתינים כמה דקות, כדי למנוע עיבוי בתוך הבקבוקון.
- 2
מחטאים את הפקקים
מנגבים בפד אלכוהול את פקק הגומי של בקבוקון הפפטיד ושל בקבוק המים, ונותנים להם להתייבש.
- 3
מושכים את המים
מושכים במזרק סטרילי את כמות המים הרצויה. לבקבוקון של 10mg הכמות המקובלת היא 2mL.
- 4
מוסיפים לאט, על הדופן
מחדירים את המחט דרך הפקק ומזרימים את המים לאט על דופן הבקבוקון, לא ישירות על האבקה.
- 5
מסובבים בעדינות, לא מנערים
מסובבים את הבקבוקון בתנועה מעגלית עדינה עד שהאבקה נמסה לגמרי והתמיסה צלולה. ניעור עלול לפגוע במבנה הפפטיד.
- 6
מסמנים ומאחסנים
רושמים על הבקבוקון את תאריך ההכנה ואת הריכוז, ומעבירים מיד לקירור.
איך מחשבים ריכוז
הריכוז הוא כמות הפפטיד חלקי כמות המים:
ריכוז (mg/mL) = כמות בבקבוקון (mg) ÷ מים (mL)
דוגמה
- בקבוקון של 10mg + 2mL מים = 5mg/mL (5,000mcg בכל mL)
- במזרק U-100, כל יחידה מכילה 50mcg
- כמות של 500mcg היא 0.1mL, כלומר 10 יחידות
טבלת המרה: יחידות מזרק ל-mL
במזרק U-100 יש 100 יחידות בכל 1mL. הטבלה נכונה לכל מזרקי U-100, בכל קיבולת (0.3, 0.5 או 1mL).
| יחידות במזרק | נפח (mL) | כמות בריכוז 5mg/mL |
|---|---|---|
| 5 | 0.05 | 250mcg |
| 10 | 0.10 | 500mcg |
| 20 | 0.20 | 1,000mcg |
| 25 | 0.25 | 1,250mcg |
| 30 | 0.30 | 1,500mcg |
| 50 | 0.50 | 2,500mcg |
| 100 | 1.00 | 5,000mcg |
העמודה השלישית מתאימה לדוגמה (10mg ב-2mL). בריכוז אחר, חשבו במחשבון.
אחסון
| לפני ההכנה (אבקה) | אחרי ההכנה (תמיסה) | |
|---|---|---|
| איפה | סביבה קרירה ויבשה | מקרר, כ-4°C |
| אור | מוגן מאור ישיר וחום | מוגן מאור |
| כמה זמן | עד כשנה | כחודש |
טעויות נפוצות
- ניעור הבקבוקון: מסובבים בעדינות במקום לנער.
- הזרמת מים ישר על האבקה: מזרימים על הדופן, לאט.
- מים לא מתאימים: משתמשים במים בקטריוסטטיים, לא במי ברז או במים מינרליים.
- שכחה לסמן: בלי תאריך וריכוז על הבקבוקון קשה לדעת מה יש בו ומתי הוכן.
- שימוש חוזר במזרק: מזרק סטרילי חדש בכל פעם.
שאלות נפוצות על שחזור
לבקבוקון של 10mg הכמות המקובלת היא 2mL. יותר מים נותנים תמיסה מהולה יותר, ולכן נפח גדול יותר לכל כמות. המחשבון באתר מראה את ההשפעה של כל כמות מים.
מוכנים לחשב?
המחשבון מחשב ריכוז, נפח למשיכה ומספר יחידות לכל פפטיד בחנות.